北京大学学报(医学版)

2021, v.53(02) 355-363

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晚期糖基化终末产物抑制大鼠外周血单个核细胞及成骨细胞增殖的作用机制
Mechanism of advanced glycation end products inhibiting the proliferation of peripheral blood mononuclear cells and osteoblasts in rats

李峥;王霄;洪天配;王浩杰;高展翼;万蒙;

摘要(Abstract):

目的:探索核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)干预大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及下颌成骨细胞(osteoblasts,OB)后的作用机制,为进一步研究糖尿病所致牙周组织炎症的临床治疗提供一定的实验基础和理论依据。方法:采用经典的制备方法获得AGEs,体外分离培养大鼠OB、PBMCs。应用CCK-8活力测试检测AGEs不同浓度、不同时间对细胞活力的影响。采用Western blot及qRTPCR检测NF-κB、PI3K/PKB以及MAPK信号通路相关基因的表达变化。结果:体外成功分离并培养出PBMCs和OB,PBMCs和OB的细胞活力与AGEs的作用浓度、时间以及二者交互作用均显著相关,随着AGEs刺激浓度及时间的增加,PBMCs和OB活力显著降低(P <0.001)。AGEs刺激可显著增加PBMCs中NF-κB的表达,并使肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量增加(P <0.01);抑制NF-κB通路后,TNF-α、IL-1β含量显著降低(P <0.01)。AGEs刺激OB后,随着作用时间的延长,NF-κB p65、JNK、p38磷酸化和非磷酸化蛋白显著升高(P <0.05),而IκB磷酸化蛋白表达显著升高的同时还伴有非磷酸化蛋白表达下降(P <0.01)。在mRNA水平,NF-κB p65、JNK、p38的表达显著升高,IκB mRNA表达显著下降(P <0.05);而Akt不论是磷酸化及非磷酸化蛋白表达,还是在mRNA水平的表达,差异均无统计学意义(P> 0.05);加入MAPK信号通路抑制剂后,NF-κB p65、p38、JNK磷酸化和非磷酸化蛋白表达较只加了AGEs组均显著降低,IκB磷酸化蛋白显著降低,非磷酸化蛋白显著升高(P <0.05); qRT-PCR结果发现,与只加了AGEs组相比,加入JNK通路阻断剂后IκB表达显著升高(P <0.05),NF-κB p65、p38、JNK的表达呈下降趋势,但差异不具有统计学意义(P> 0.05);与只加了AGEs组相比,加入p38信号通路阻断剂后NF-κB p65、p38、JNK的表达显著降低(P <0.05),IκB表达显著升高(P <0.05);而Akt改变在蛋白水平和mRNA水平依然未见统计学意义(P> 0.05)。结论:AGEs能够抑制PBMCs和OB的增殖,NF-κB和MAPK信号通路很有可能参与调控过程,但与PI3K/PKB信号通路无关。

关键词(KeyWords): 晚期糖基化终末产物;外周血单个核细胞;成骨细胞;信号传导

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 中华口腔医学会口腔疾病与全身疾病关系研究专项基金(CSA-Y2015-08)~~

作者(Author): 李峥;王霄;洪天配;王浩杰;高展翼;万蒙;

Email:

DOI: 10.19723/j.issn.1671-167X.2021.02.021

参考文献(References):

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